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chunshiluoye的博客

 
 
 

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快速质粒鉴定方法  

2009-06-12 16:43:54|  分类: 分子生物 |  标签: |举报 |字号 订阅

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1.用1.5ml离心管收集一定量(1ml,留0.2ml)含有重组质粒的菌液,10000rpm, 30sec,弃上 清,留管底沉淀(应留有一定量(0.2)的菌液放于4度中,以备摇菌)
2.加入30-50ul TE ,重悬菌液,混合均匀
3.加入25ul 酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),混合均匀
4.加入5ul 上样缓冲液(6X or10X),混合均匀,12000rpm, 10min,
取蓝色上清液(约20-30ul)直接进行电泳,结果会显示条带
a:最上边,几万bp的条带是基因组DNA
b:其次,下边是你所要的重组质粒,约几千bp
c:再下边可能会出现RNA的三条带,总共就这几条带
通过经验,来判断一下看看哪个应该是连上了,哪个没连上,最后把连上的那个挑出来,然后用放在 4度中的对应的那个菌,摇菌,第二天再提质粒
就可以了。简单,方便,省时,省钱....
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