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微生物的繁殖数计算  

2009-05-26 15:14:51|  分类: 微生物 |  标签: |举报 |字号 订阅

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测定微生物繁殖,一定要计算各个体的数目。
单细胞状态的细菌和酵母菌——计算各个体的数目
放线菌和霉菌等丝状生长的微生物——计算其孢子数
1.繁殖数直接计数法
(1) 计数板直接计数法
指采用计数板(细菌计数板或血球计数板),在光学显微镜下直接观察微生
物细胞并进行计数的方法。(计算一定容积里样品中微生物的数量)
缺点:
不能区分死菌与活菌;
不适于对运动细菌的计数;
需要相对高的细菌浓度;
个体小的细菌在显微镜下难以观察;
(2)染色后活菌计数法
采用特定的染色技术进行活菌染色,然后用光学显微镜计数的方法。可分别对活菌和死菌进行计数。
例:美蓝染色酵母 活细胞→无色 死细胞→蓝色
Eg. 细菌经丫啶橙染色后,在紫外光显微镜下可观察 活细胞→橙色荧光 死细胞→绿色荧光
(3)比例计数法死细胞→蓝
将已知颗粒浓度的样品(例如血液)与待测细胞细胞浓度的样品混匀后在显微镜下根据二者之间的比例直接推算待测微生物细胞浓度。
(4)过滤计数法
当样品中菌数很低时,可以将一定体积的样品通过膜过滤器。然后将滤膜干燥、染色,并经处理使膜透明,再在显微镜下计算膜上(或一定面积中)的细菌数。
(5)Coulter 电子计数器
菌体与液体导电性不同, 一个细胞通过小孔,电阻增加,形成一个脉冲。
(6)菌丝长度
平板 U行管
2.繁殖数间接计数法
是一种活菌计数法,这是一种依据活菌在液体培养基中会使其变混或在固体培养基上(内)形成菌落的原理而设计。
最常用的是菌落计数法(colony-counting methods)。
(1)平板菌落计数法
可用浇注平板(pour plate)或涂布平板(spread plate)等方法进行。此法适用于各种好氧菌或厌氧菌。

采用培养平板计数法要求操作熟练、准确,否则难以得到正确的结果。
样品充分混匀;每支移液管及涂布棒只能接触一个稀释度的菌液; 同一稀
释度三个以上重复,取平均值; 每个平板上的菌落数目合适(30-300),便于准确计
数;

一个菌落可能是多个细胞一起形成,所以在科研中一般用菌落形成单位
(colony forming units, CFU)来表示,而不是直接表示为细胞数。
根据每皿上形成的CFU数乘上稀释度可推算出菌样的含菌数。此方法最为常用,
但操作较繁琐且要求操作者技术熟练——缺点。

国外出现了微型、快速、商品化的用于菌落计数的小型纸片或密封琼脂板。原
理是利用加在培养基中的活菌指示剂TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑),它可使
菌落在很微小时就染成易于辨认的玫瑰色。

(2)膜过滤培养菌落计数法

当样品中菌数很低时,可以将一定体积的湖水、海水或饮用水等样品通过膜过滤器,然后将将膜转到相应的培养基上进行培养,对形成的菌落进行统计。



(3)厌氧菌的菌落计数法

一般可用亨盖特滚管培养法进行。此法设备较复杂,技术难度很高。

简便快速的半固体深层琼脂法,可测定双歧杆菌(bifidobacteria)和乳酸菌
(lactic acid bacteria)等厌氧菌活菌数。

原理:
试管中的深层半固体琼脂有良好的厌氧性能,并利用其凝固前
可作稀释用,凝固后又可代替琼脂平板作菌落计数用的良好性能。
兼有省工、省料、省设备和菌落易辩认等优点!
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