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免疫胶体金稀释液的配伍原则  

2009-05-18 16:13:03|  分类: 胶体金 |  标签: |举报 |字号 订阅

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本帖引用网址:http://bbs.bbioo.com/thread-17302-1-1.html

免疫胶体金稀释液的配伍原则(前面我一个回帖成此文,发现太长了,不发新帖可惜,呵呵)

制备好免疫胶体金后,还需要将其稀释到一定浓度,并吸附于特殊的惰性介质中才能够最终制成产品。一般来说,特殊的介质常用的是玻璃纤维或无纺布。玻璃纤维和无纺布本身一般是疏水的,胶体金产业一般采用表面活性剂预处理过的玻璃纤维或无纺布,通常配方为1%Tween20+适量PVA。

介质处理完成后,免疫胶体金稀释液的配伍才是最关键的。现总结原则如下,不足之处欢迎批评或补充。

1 合适的离子种类和强度

免疫胶体金毕竟是含有生物活性分子,应用时还要面对千差万别的样品,原则上需要稀释在合适pH的缓冲液中。经验值是6-9。在这个范围内可选的缓冲主要有tris和PB,也不排除其他种类缓冲适用的可能。当使用的缓冲离子强度过大如超过0.2M时,有可能造成释放、层析不好或检测结果异常。离子的种类也因为免疫胶体金的生物分子不同而有诸多限制,例如钙调蛋白可能与Ca离子有关系。而卤素离子强度对胶体金稳定性似乎有特殊的破坏作用,教科书式的NaCl调试最适标记条件就是例子。

2 大分子物质作为胶体金干燥后均匀散布的骨架

这个其实是冻干工艺的理论基础,适用于胶体金干燥工艺,对冻干有研究的应该对这个工艺感觉很小儿科。抽真空是一个热力学吸热过程,实验表明免疫胶体金的真空干燥是一个先冷冻再升华的过程,十分类似冻干。无纺布材料的工艺由于干燥过程快,多数采用烤干的工艺,但是大分子的骨架作用仍然是对产品的释放速度和比率有很大帮助。常用大分子物质如PEG4000,PEG20000,PVP等,建议尽量从中选择一种添加使用。

3 小分子物质对蛋白活性保护

蛋白储存常用的甘油、蔗糖、海藻糖、各类低聚糖等,对产品的储存稳定性有帮助,忽略这部分物质的添加可能限制产品从实验室走生产和市场。这类物质也是冻干细胞常用的。

4 惰性蛋白(不是可以吃了变懒惰的蛋白)

这类物质的功能就更复杂。首先还是保护目的蛋白的活性,也维持胶体金的胶体稳定,它们是消除非特异性的封闭物质,也起着有分散胶体金颗粒的骨架作用。常用有BSA 、OVA、Casein,其他廉价蛋白似乎不太好找,脱脂奶粉个人建议不用,质量太难控制了,当然如果大家已经在用而且效果不错,也没有必要过于担心。

5表面活性剂

这个东西在这个产业里可是万万不能缺少,但是吸附材料已经用表面活性预处理的,也可以不拘泥于添加在免疫胶体金稀释液里。一般情况下,Tween20就可以了,其实蛋白质复性常用的非离子型表面活性剂都可以一试,前一段时间某位高人说tritonX-100等可能会干扰蛋白的N末端建议不要用,我听了不是很理解,在这里请高人指点。

6特殊

产品种类千差万别,以上5类物质外,传说还有一些可以"提高产品敏感性",“提高产品检测线性范围”、“强制转换毒品检测最佳cut-off范围”、“HAMA效应抑制”、”线条规定时间深度变化终止“等等的神秘添加物,从理论上不排除存在的可能,但是往往一种”神物“有效的范围十分狭窄,也就是说一种”神物“可能只适用于一个公司一种抗体的一个产品,换个环境就无效了。寻找神物的工作往往是研发型的大公司的资深技术人员,而对神物的控制往往也是如同企业一级机密。

我个人感觉,初入此行(10年以内),还是专心于基础配方的理解和应用,同时不能因为该行业的应用性太强而忽略了自身的理论修养。(前面我发帖说生物学还还处在当面物理学的亚里士多德时代,生物学的理论突破还要有思路、方法的突破和上百年的积累和天才的诞生,跑题了,呵呵)等技术人员对多个产品和多个工艺有了全局的全面的认识,能够用理论融会贯通,再寻求突破比较扎实些。以此文向各位同志共勉!

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