林慈信牧师网络神学课程录音及教材（更新转贴）
2010-3-31 11:41:30 阅读1517 评论0 312010/03 Mar31
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神學導論
60 lessons
《保罗神学》: 羅馬書第一至八章 19 lessons 《保罗神学》: 聖經神學 33 lessons 奇异恩典 38 lessons 認識恩典之約 28 lessons 早期基督教教义史 28 lessons 教会论与宣教学 30 lessons
神學導論
第一課 listen
「成聖」，什麼是「屬靈」？
notes/Readings 第二課
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神學導論
60 lessons
《保罗神学》: 羅馬書第一至八章 19 lessons 《保罗神学》: 聖經神學 33 lessons 奇异恩典 38 lessons 認識恩典之約 28 lessons 早期基督教教义史 28 lessons 教会论与宣教学 30 lessons
神學導論
第一課 listen
「成聖」，什麼是「屬靈」？
notes/Readings 第二課
圣经中对丈夫说的话（三）
2009-9-23 20:08:48 阅读525 评论0 232009/09 Sept23
标签：圣经婚姻辅导
林慈信
圣经中对丈夫说的话（三）
爱是甚么？
保罗在此告诉我们，爱是舍己，为人而舍己，不是收取，这是世人的想法。
爱不是感觉或欲望，不是一种人无法控制的东西。
爱是我们做在对方身上的，不是抽象的。
爱是一种态度，能表现出实际可触摸的行动的。
注意本段经文，基督爱教会，为教会舍己。
约翰福音三章十六节说：‘神爱世人，甚至将祂的独生子，赐给他们。’
加拉太书二章廿节：‘祂是爱我，为我舍己。’、
‘你的仇敌若饿了，就给他吃；若渴了，就给他喝’、‘逼迫你们的，要给他们祝福。’
爱并不是感觉，乃是为别人舍己。
荷里活、电视、唱片把爱歪曲了，
现在到处流行的，爱是一种逢场作庆的事，偶然巧合地发生罢了。
‘我就是无法控制，不由自主。’
那在车厢后座与女朋友出了乱子的男孩子这样说：‘我不由自主。’
他是以感觉为导，而不是以爱为导；
他是以情欲为动机，而不是以爱为动机。
爱一定是受控制，是一个命令。
基督命令我们：‘爱你的仇敌。’
林慈信
圣经中对丈夫说的话（三）
爱是甚么？
保罗在此告诉我们，爱是舍己，为人而舍己，不是收取，这是世人的想法。
爱不是感觉或欲望，不是一种人无法控制的东西。
爱是我们做在对方身上的，不是抽象的。
爱是一种态度，能表现出实际可触摸的行动的。
注意本段经文，基督爱教会，为教会舍己。
约翰福音三章十六节说：‘神爱世人，甚至将祂的独生子，赐给他们。’
加拉太书二章廿节：‘祂是爱我，为我舍己。’、
‘你的仇敌若饿了，就给他吃；若渴了，就给他喝’、‘逼迫你们的，要给他们祝福。’
爱并不是感觉，乃是为别人舍己。
荷里活、电视、唱片把爱歪曲了，
现在到处流行的，爱是一种逢场作庆的事，偶然巧合地发生罢了。
‘我就是无法控制，不由自主。’
那在车厢后座与女朋友出了乱子的男孩子这样说：‘我不由自主。’
他是以感觉为导，而不是以爱为导；
他是以情欲为动机，而不是以爱为动机。
爱一定是受控制，是一个命令。
基督命令我们：‘爱你的仇敌。’
圣经中对丈夫说的话（二）(
2009-9-23 20:07:50 阅读491 评论0 232009/09 Sept23
标签：圣经婚姻辅导
接上篇圣经中对丈夫说的话（一）
http://blog.sina.com.cn/s/blog_5e2a2ea00100f7nz.html
林慈信
圣经中对丈夫说的话（二）
领导全家的意思，
是要照顾全家的需要，肉身的需用、食物、衣服、居住…，
这一切称为日常必需的，都要供给他们。
可是，这一方面的供给，一般做丈夫的都没有多大的错失。
丈夫们最易失败的地方、最易在领导地位上失职的地方，正是人人以为他该最强的方面
从这经文看来，你会觉得丈夫最热心于领导的，
应该是家庭崇拜、家庭查经、家庭祷告、家庭参加教会、家庭在社会的见证，
和家庭直接向神的关系，实行神在家庭及个人身上所交托的工作。
你会期望他热心于按照神的旨意教导儿女。
可是，这正是丈夫们最一败涂地的地方，
多少时候妻子成为这方面的主力，
只有她不断推行这些活动，她往往要催丈夫说：‘今晚到礼拜堂聚会去吧！’
接上篇圣经中对丈夫说的话（一）
http://blog.sina.com.cn/s/blog_5e2a2ea00100f7nz.html
林慈信
圣经中对丈夫说的话（二）
领导全家的意思，
是要照顾全家的需要，肉身的需用、食物、衣服、居住…，
这一切称为日常必需的，都要供给他们。
可是，这一方面的供给，一般做丈夫的都没有多大的错失。
丈夫们最易失败的地方、最易在领导地位上失职的地方，正是人人以为他该最强的方面
从这经文看来，你会觉得丈夫最热心于领导的，
应该是家庭崇拜、家庭查经、家庭祷告、家庭参加教会、家庭在社会的见证，
和家庭直接向神的关系，实行神在家庭及个人身上所交托的工作。
你会期望他热心于按照神的旨意教导儿女。
可是，这正是丈夫们最一败涂地的地方，
多少时候妻子成为这方面的主力，
只有她不断推行这些活动，她往往要催丈夫说：‘今晚到礼拜堂聚会去吧！’
圣经中对丈夫说的话（一）
2009-9-11 17:59:02 阅读470 评论1 112009/09 Sept11
标签：圣经婚姻辅导
林慈信
丈夫的工作
爱的前导
从以弗所书第五章二十二节起的一段经文中，可以用两句问话囊括起来：
丈夫，你爱妻子至为她舍命吗？
妻子，你爱丈夫至为他而活吗？
保罗先对女的说，然后才对男的说，所以我们就照他的次序。
现在来看看第一个问题，看它在信徒家庭中有何作用。
丈夫对妻子的关系是甚么？
一页纸有两面看，一面是要顺服，女人要顺服丈夫，如同教会顺服基督。
保罗用三方面清楚明确地指明这一点，以至没有人能逃避这个责任。
神把这责任放在所有信徒妻子身上，为她本身的益处，也为她丈夫的益处。
他说，妻子要顺服丈夫为自己的头，正如基督是教会的头﹙23节﹚。
从这里他开始解释做‘头’的责任：
‘你们作丈夫的，要爱你们的妻子，正如基督爱教会，为教会舍己。
要用水藉着道，把教会洗净，成为圣洁，
可以献给自己，作个荣耀的教会，毫无玷污皱纹等类的病，乃是圣洁没有瑕疪的。
丈夫也当照样爱妻子，如同爱自己的身子。爱妻子，便是爱自己了。
从来没有人恨恶自己的身子，总是保养顾惜，正像基督待教会一样。
林慈信
丈夫的工作
爱的前导
从以弗所书第五章二十二节起的一段经文中，可以用两句问话囊括起来：
丈夫，你爱妻子至为她舍命吗？
妻子，你爱丈夫至为他而活吗？
保罗先对女的说，然后才对男的说，所以我们就照他的次序。
现在来看看第一个问题，看它在信徒家庭中有何作用。
丈夫对妻子的关系是甚么？
一页纸有两面看，一面是要顺服，女人要顺服丈夫，如同教会顺服基督。
保罗用三方面清楚明确地指明这一点，以至没有人能逃避这个责任。
神把这责任放在所有信徒妻子身上，为她本身的益处，也为她丈夫的益处。
他说，妻子要顺服丈夫为自己的头，正如基督是教会的头﹙23节﹚。
从这里他开始解释做‘头’的责任：
‘你们作丈夫的，要爱你们的妻子，正如基督爱教会，为教会舍己。
要用水藉着道，把教会洗净，成为圣洁，
可以献给自己，作个荣耀的教会，毫无玷污皱纹等类的病，乃是圣洁没有瑕疪的。
丈夫也当照样爱妻子，如同爱自己的身子。爱妻子，便是爱自己了。
从来没有人恨恶自己的身子，总是保养顾惜，正像基督待教会一样。
圣经辅导丛书
2009-7-27 16:44:14 阅读467 评论0 272009/07 July27
《輔導總論》
1.聖經輔導入門，偉恩.麥克等，江淑敏譯，華神出版
2.聖經輔導入門﹕輔導基本原則與實踐的基本指南，華神出版社
3. 聖靈的勸戒－成功的聖經輔導，亞當斯博士著，陳若愚譯，中華展望China Horizon
《心靈輔導﹕生命成長操練》
1.竭誠為主（章伯斯著）
2.朝聖之路，臺北友友出版社
3.上帝配得一切，臺北友友出版社
4.在聖靈裏的生命（巴刻著），天道
5.亦師亦友
6. 366禱告秘訣﹕向屬靈偉人學禱告，扶逸蕙譯，臺北道聲出版社
7.信徒之家,中華展望
8.喜樂的生命（施寧著，橄欖出版社）、
9.新（施寧著，亞洲歸主協會、創始靈職團出版）
10.愛祂（施寧著，亞洲歸主協會、創始靈職團出版）
11.天路歷程，本仁約翰，基督教文藝出版社，2001年六月二十一版，本書中譯本為1999年10月重排修訂本（有許牧世寫的序）
12.磐石之上 (Christian Life), by Sinclair B. Ferguson，中華展望出版
13.與神同在/勞倫斯(Bother Lawrence) 著/俞成華 譯, The Practice of the Presence of God.
14.禱告的學校, 慕安得烈 Murray, Andrew/董挽華/吳碧霜 /校園書房, 1986
15.新眼新見（Seeing With New Eyes）（聖經輔導叢書3），真生命輔導傳道會出版
1.聖經輔導入門，偉恩.麥克等，江淑敏譯，華神出版
2.聖經輔導入門﹕輔導基本原則與實踐的基本指南，華神出版社
3. 聖靈的勸戒－成功的聖經輔導，亞當斯博士著，陳若愚譯，中華展望China Horizon
《心靈輔導﹕生命成長操練》
1.竭誠為主（章伯斯著）
2.朝聖之路，臺北友友出版社
3.上帝配得一切，臺北友友出版社
4.在聖靈裏的生命（巴刻著），天道
5.亦師亦友
6. 366禱告秘訣﹕向屬靈偉人學禱告，扶逸蕙譯，臺北道聲出版社
7.信徒之家,中華展望
8.喜樂的生命（施寧著，橄欖出版社）、
9.新（施寧著，亞洲歸主協會、創始靈職團出版）
10.愛祂（施寧著，亞洲歸主協會、創始靈職團出版）
11.天路歷程，本仁約翰，基督教文藝出版社，2001年六月二十一版，本書中譯本為1999年10月重排修訂本（有許牧世寫的序）
12.磐石之上 (Christian Life), by Sinclair B. Ferguson，中華展望出版
13.與神同在/勞倫斯(Bother Lawrence) 著/俞成華 譯, The Practice of the Presence of God.
14.禱告的學校, 慕安得烈 Murray, Andrew/董挽華/吳碧霜 /校園書房, 1986
15.新眼新見（Seeing With New Eyes）（聖經輔導叢書3），真生命輔導傳道會出版
认识新时代(新纪元)运动
2009-7-11 10:25:02 阅读206 评论0 112009/07 July11
作者：郝万以嘉传道
一、甚么是新时代运动？
几年前教会夏令退修会中有人带了位慕道友来，问我可否和他一同吃午餐，我当然说可以，我很喜欢传福音。这慕道友的眼光有些涣散，他说有很大的困扰，曾因身体不好练过气功。之后发现自己运气可到灵魂出窍的地步。问他如何知道灵魂出窍了？他说因看见自己躺着的身体，他的灵会接触很多不同的可怕东西。再问他可否不让灵魂出去？他答曾试着不让灵魂出去，晚上睡觉从不敢关灯，有时并没有要打坐，但灵魂也会出去。有一次他紧抓着单人床床沿，可是再怎么抓紧，他的灵还是出去。好可怕！他问：“师母， 你可以帮助我吗？”我当时就向他传福音，但这情况需要时间，不是马上传，马上就能受到控制，因为他的灵已经常出窍，这是很危险的情况。这其实是属于新时代运动New Age Movement中的现象，很多人不知道这种危险的存在。
另有位姐妹(是初中高中就决志信主的)，买房子时，她说现在不能搬，因为风水不对。问：“你不是基督徒吗？”她说：“风水跟基督徒没有关系。风水很重要，石狮子、水晶怎么放能带出不同的结果。”风水在美国越来越流行，这也是新时代运动的一种。
新时代运动包含：轮回、禅宗(打坐、寂静)、气功冥想、理性－心里怎么想就怎么是、通灵、本土文化－新时代运动讲心灵和内在，在任何地方都跟当地本土文化结合、成功神学(就是“信神就有金钱、健康…”)、卜卦、世界合一、进化论、直觉、自我治疗、结合现代化、囊括所有宗教(每放进一样就加强它的声势，吸收更多信徒)…这些都在内，是最近二三十年流行的，其实和新时代运动都有关系。
一、甚么是新时代运动？
几年前教会夏令退修会中有人带了位慕道友来，问我可否和他一同吃午餐，我当然说可以，我很喜欢传福音。这慕道友的眼光有些涣散，他说有很大的困扰，曾因身体不好练过气功。之后发现自己运气可到灵魂出窍的地步。问他如何知道灵魂出窍了？他说因看见自己躺着的身体，他的灵会接触很多不同的可怕东西。再问他可否不让灵魂出去？他答曾试着不让灵魂出去，晚上睡觉从不敢关灯，有时并没有要打坐，但灵魂也会出去。有一次他紧抓着单人床床沿，可是再怎么抓紧，他的灵还是出去。好可怕！他问：“师母， 你可以帮助我吗？”我当时就向他传福音，但这情况需要时间，不是马上传，马上就能受到控制，因为他的灵已经常出窍，这是很危险的情况。这其实是属于新时代运动New Age Movement中的现象，很多人不知道这种危险的存在。
另有位姐妹(是初中高中就决志信主的)，买房子时，她说现在不能搬，因为风水不对。问：“你不是基督徒吗？”她说：“风水跟基督徒没有关系。风水很重要，石狮子、水晶怎么放能带出不同的结果。”风水在美国越来越流行，这也是新时代运动的一种。
新时代运动包含：轮回、禅宗(打坐、寂静)、气功冥想、理性－心里怎么想就怎么是、通灵、本土文化－新时代运动讲心灵和内在，在任何地方都跟当地本土文化结合、成功神学(就是“信神就有金钱、健康…”)、卜卦、世界合一、进化论、直觉、自我治疗、结合现代化、囊括所有宗教(每放进一样就加强它的声势，吸收更多信徒)…这些都在内，是最近二三十年流行的，其实和新时代运动都有关系。
影响我一生的十本书 林慈信
2009-7-11 8:55:33 阅读597 评论0 112009/07 July11
我生长在香港一所神学院里。父母亲每天都在床前祷告、灵修。星期三晚上，学院有祷告会(我当时还是小孩，没有参加)；星期六晚上，有青年团契活动(我到初中才开始参加)，后来又加设主日崇拜。
上五年级时，在听了主日学老师(周约彼牧师)关于接受耶稣为个人救主的课之后，我开始尝试每天读经、祷告。十四岁那年(1965年8月27日)，我参加了香港的英语培灵会(Hong Kong Keswick Convention)后，决志奉献自己，一生为主所用。
圣经启迪终身受益
最影响我一生的理所当然是圣经，神所默示的无误启示--脚前的灯，路上的光。
幼年时，在香港没有太多的基督教书籍，也没有什么导师指导如何在信仰上扎根(只知道到了基督教书店就极想把全部书籍都买下来搬回家)。 十四岁那年我到了美国，十六岁时搬到费城。中学的最后半年，我开始参加在已故韩伟博士家中举行的费城中文查经班。当时，有威敏斯特神学院的中国学生们--赵天恩、周永健、陈济民、高集乐等教导我们查经。更重要的是让我有机会接受了「预查」--如何带领以及准备一次小组查经的训练，每次约花上三个小时。通常在赵天恩、郑期卿夫妇家里举行。
工具书籍查经指引
《研经日课》
通过有系统的查经学习和「预查」训练，我开始用一些工具书。记得当时用得最多的是Search the Scriptures (Downers Grove, IL: InterVarsity Press)，中译本书名为《研经日课》，共三册，由香港福音证主协会出版。这本篇幅不大的查经指引，对每段经文都
上五年级时，在听了主日学老师(周约彼牧师)关于接受耶稣为个人救主的课之后，我开始尝试每天读经、祷告。十四岁那年(1965年8月27日)，我参加了香港的英语培灵会(Hong Kong Keswick Convention)后，决志奉献自己，一生为主所用。
圣经启迪终身受益
最影响我一生的理所当然是圣经，神所默示的无误启示--脚前的灯，路上的光。
幼年时，在香港没有太多的基督教书籍，也没有什么导师指导如何在信仰上扎根(只知道到了基督教书店就极想把全部书籍都买下来搬回家)。 十四岁那年我到了美国，十六岁时搬到费城。中学的最后半年，我开始参加在已故韩伟博士家中举行的费城中文查经班。当时，有威敏斯特神学院的中国学生们--赵天恩、周永健、陈济民、高集乐等教导我们查经。更重要的是让我有机会接受了「预查」--如何带领以及准备一次小组查经的训练，每次约花上三个小时。通常在赵天恩、郑期卿夫妇家里举行。
工具书籍查经指引
《研经日课》
通过有系统的查经学习和「预查」训练，我开始用一些工具书。记得当时用得最多的是Search the Scriptures (Downers Grove, IL: InterVarsity Press)，中译本书名为《研经日课》，共三册，由香港福音证主协会出版。这本篇幅不大的查经指引，对每段经文都
教会如何为基督徒办理丧事礼拜
2009-7-4 8:02:07 阅读1872 评论2 42009/07 July4
本文转自思天客的博客:http://blog.sina.com.cn/sitianke
作为一个带领教会的弟兄,常常会碰到身边的弟兄姊妹离开世界的事情,这个时候会有一个责任压在我们的身上————家属要求教会办理后事,因此学习和熟悉丧事礼拜的过程是很有必要的。笔者几乎每年都要送一个甚至好几个离世的肢体，有时会应邀参加丧事的礼拜，于是把自己的一些经验整理如下：
一、基督徒办理丧事礼拜的前提：
基督徒离开世界已经是安睡主怀，教会可根据亲属的要求为离世者举办丧事的礼拜，但要看具体情况来决定是否由教会出面举办丧事礼拜。
如果离世者的亲属是主内的肢体的，这方面当然不会存在问题，但现今教会的普遍现象是年老的信徒多，而其子女有许多不跟随父母相信。这样的家庭是“撒玛利亚之家”———人种混杂之家。如果这样的家庭中的父母离开世界，除了其子女强烈要求并且顺服教会安排的，教会可以不理会他（她）的后事。理由有三：一是教会并不是丧事委员会，教会的主要责任是传扬福音，正如圣经上说：让死人埋葬他们的死人。二是教会在不信的家庭中举办丧事礼拜并不能有效地控制局面，不信的亲友他们因为不信神，有着各样的忌讳，不能很好地起到配合的作用，“信和不信的不能同负一轭”，以致羞辱主的名。三是会造成许多人的贪心，因为主内的丧事礼拜节约，基督徒的爱心大，许多人贪图这方面的照顾，特别是一些农村的不信子女，把父母的后事完全推给教会，从收殓到入葬弟兄姊妹全程服务，致使教会在这方面花费大量人力物力财力，拖垮了教会同工的心思和力量。如果教会楞要插手这方面的事务，祸贻众矣。
作为一个带领教会的弟兄,常常会碰到身边的弟兄姊妹离开世界的事情,这个时候会有一个责任压在我们的身上————家属要求教会办理后事,因此学习和熟悉丧事礼拜的过程是很有必要的。笔者几乎每年都要送一个甚至好几个离世的肢体，有时会应邀参加丧事的礼拜，于是把自己的一些经验整理如下：
一、基督徒办理丧事礼拜的前提：
基督徒离开世界已经是安睡主怀，教会可根据亲属的要求为离世者举办丧事的礼拜，但要看具体情况来决定是否由教会出面举办丧事礼拜。
如果离世者的亲属是主内的肢体的，这方面当然不会存在问题，但现今教会的普遍现象是年老的信徒多，而其子女有许多不跟随父母相信。这样的家庭是“撒玛利亚之家”———人种混杂之家。如果这样的家庭中的父母离开世界，除了其子女强烈要求并且顺服教会安排的，教会可以不理会他（她）的后事。理由有三：一是教会并不是丧事委员会，教会的主要责任是传扬福音，正如圣经上说：让死人埋葬他们的死人。二是教会在不信的家庭中举办丧事礼拜并不能有效地控制局面，不信的亲友他们因为不信神，有着各样的忌讳，不能很好地起到配合的作用，“信和不信的不能同负一轭”，以致羞辱主的名。三是会造成许多人的贪心，因为主内的丧事礼拜节约，基督徒的爱心大，许多人贪图这方面的照顾，特别是一些农村的不信子女，把父母的后事完全推给教会，从收殓到入葬弟兄姊妹全程服务，致使教会在这方面花费大量人力物力财力，拖垮了教会同工的心思和力量。如果教会楞要插手这方面的事务，祸贻众矣。
美国:一个敌视基督教的国家/林慈信
2009-6-24 11:43:41 阅读294 评论0 242009/06 June24
很多人错误地以为美国是一个「基督教国家」；可是又不能解释，为什么这个所谓基督教的国家，基督徒与非基督徒的离婚率没有什么差别？为什么大部份福音派的教会里的青少年 (teenagers) 在中学毕业之前已经有过性行为？大部份都曾经在学业上作弊？为什么福音派的教会里的青少年，91% 不相信宇宙有绝对真理的存在？美国若是一个基督教的国家，为什么社会上的道德越来越不象样？为什么不顾一切侵略回教国家，重复了十字军在中东引起的仇恨？
美国﹕一个敌视基督教的国家
事实上不是如此。美国不是一个「基督教国家」。美国目前，不论从宪法来看，或者从文化的价值观取向来看，都是一个颇「敌视基督教」的国家 (an anti-Christian nation)。听起来好像非常刺耳，可是确是事实。我们必需补充﹕这个「敌视基督教的国家」里，有很多非常爱主，行为表现非常出色的基督徒，也有很多非常纯正信仰的教会。他们很多人士都为美国祷告，求神挽回这个国家，不至于完全沉沦（好像罗马帝国一样）。美国有38% 人口认为自己是经常参加宗教崇拜的。
首先，让我们澄清一件事﹕怎样才算是一个「基督教国家」？有两个可能﹕（一）国家的宪法规定基督教是国教 (national religion)；或（二）该国家的社会风俗、文化所反映的世界观 (worldview)、人民的价值观 (value system)，绝大多数的成分来自基督教信仰。
从这两个角度来看，美国都不是一个基督教国家。
美国宪法﹕「政教分离」的意义？
首先让我们看美国的宪法。很多人会打「政教分离」
美国﹕一个敌视基督教的国家
事实上不是如此。美国不是一个「基督教国家」。美国目前，不论从宪法来看，或者从文化的价值观取向来看，都是一个颇「敌视基督教」的国家 (an anti-Christian nation)。听起来好像非常刺耳，可是确是事实。我们必需补充﹕这个「敌视基督教的国家」里，有很多非常爱主，行为表现非常出色的基督徒，也有很多非常纯正信仰的教会。他们很多人士都为美国祷告，求神挽回这个国家，不至于完全沉沦（好像罗马帝国一样）。美国有38% 人口认为自己是经常参加宗教崇拜的。
首先，让我们澄清一件事﹕怎样才算是一个「基督教国家」？有两个可能﹕（一）国家的宪法规定基督教是国教 (national religion)；或（二）该国家的社会风俗、文化所反映的世界观 (worldview)、人民的价值观 (value system)，绝大多数的成分来自基督教信仰。
从这两个角度来看，美国都不是一个基督教国家。
美国宪法﹕「政教分离」的意义？
首先让我们看美国的宪法。很多人会打「政教分离」
原核表达个人秘籍
2009-6-17 11:54:07 阅读331 评论0 172009/06 June17
By aqiao 发表于 2007-12-7 10:24:00
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秘笈：表达前的分析比什么都重要
表达不同于其它一些实验，比如：提取质粒、PCR、电镜切片，这些人为控制的因素比较多，出问题相对来说也比较好分析。表达呢，你把质粒克隆好啦，交给细胞，然后有些事情就不全是你要怎样就怎样了。原核表达在表达当中来说还是比较简单，细菌培养条件简单、生长速度快，需要的仪器和培养基都比较便宜。当然，它也存在一些缺乏高级修饰、细胞内部还原性过高等缺点。
原核表达从一开始的设计就非常重要，所谓好的开始是成功的一半。做足准备功夫，可是省去很多将来后悔的事情。首先，我们要根据是否要求可溶将载体分成两大类，如果希望可以同时尝试多种表达系统，也有许多商业化的系统供选择。
前面已经介绍过许多公司的商业化载体、菌株和多系统表达体系，现在我想先从自己的蛋白分析讲起。同样的载体、同样的系统，很可能表达这个蛋白表达量奇高，但是另外一个就是做不出来，所以没有万能的载体，只有永恒的分析。当然如果你的蛋白曾经在原核系统中成功表达出来那是最好的，选择同样的载体表达成功率会高很多。如果没有也最好尝试找一些曾经表达过和你的蛋白拥有相类似结构的文献。比如大部分含有哺乳动物src同源的SH2蛋白相互作用域的蛋白都是用pGEX系列载体表达出来的。根据经验而言，含有较少半胱氨酸和脯氨酸的、平均大小为60kD的单体蛋白较容易表达。
在下面将列出几个影响表达的因素，大家可以在表达前根据这几个因素自己分析一下：
2
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秘笈：表达前的分析比什么都重要
表达不同于其它一些实验，比如：提取质粒、PCR、电镜切片，这些人为控制的因素比较多，出问题相对来说也比较好分析。表达呢，你把质粒克隆好啦，交给细胞，然后有些事情就不全是你要怎样就怎样了。原核表达在表达当中来说还是比较简单，细菌培养条件简单、生长速度快，需要的仪器和培养基都比较便宜。当然，它也存在一些缺乏高级修饰、细胞内部还原性过高等缺点。
原核表达从一开始的设计就非常重要，所谓好的开始是成功的一半。做足准备功夫，可是省去很多将来后悔的事情。首先，我们要根据是否要求可溶将载体分成两大类，如果希望可以同时尝试多种表达系统，也有许多商业化的系统供选择。
前面已经介绍过许多公司的商业化载体、菌株和多系统表达体系，现在我想先从自己的蛋白分析讲起。同样的载体、同样的系统，很可能表达这个蛋白表达量奇高，但是另外一个就是做不出来，所以没有万能的载体，只有永恒的分析。当然如果你的蛋白曾经在原核系统中成功表达出来那是最好的，选择同样的载体表达成功率会高很多。如果没有也最好尝试找一些曾经表达过和你的蛋白拥有相类似结构的文献。比如大部分含有哺乳动物src同源的SH2蛋白相互作用域的蛋白都是用pGEX系列载体表达出来的。根据经验而言，含有较少半胱氨酸和脯氨酸的、平均大小为60kD的单体蛋白较容易表达。
在下面将列出几个影响表达的因素，大家可以在表达前根据这几个因素自己分析一下：
Western免疫印迹
2009-6-16 15:28:58 阅读168 评论0 162009/06 June16
Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。
一、原理
与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。
二、试剂准备
1、SDS-PAGE试剂:见电泳实验。
2、匀浆缓冲液：1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.Oml；10%SDS 6.0ml；β-巯基乙醇 0.2ml；ddH2O 2.8ml。
3、转膜缓冲液：甘氨酸 2.9g；Tris 5.8g；SDS 0.37g；甲醇200ml；加ddH2O定容至1000ml。
4、0.01M PBS(pH7.4)：NaCl 8.0g；KCl 0.2g；Na2HPO4 1.44g；KH2PO4 0.24g；加ddH2O至1000ml。
5、膜染色液：考马斯亮兰 0.2g；甲醇80ml；乙酸2ml；ddH2O118 ml。包被液（5%脱脂奶粉，现配）：脱脂奶粉1.0g 溶于20ml的0.01M PBS中。
一、原理
与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。
二、试剂准备
1、SDS-PAGE试剂:见电泳实验。
2、匀浆缓冲液：1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.Oml；10%SDS 6.0ml；β-巯基乙醇 0.2ml；ddH2O 2.8ml。
3、转膜缓冲液：甘氨酸 2.9g；Tris 5.8g；SDS 0.37g；甲醇200ml；加ddH2O定容至1000ml。
4、0.01M PBS(pH7.4)：NaCl 8.0g；KCl 0.2g；Na2HPO4 1.44g；KH2PO4 0.24g；加ddH2O至1000ml。
5、膜染色液：考马斯亮兰 0.2g；甲醇80ml；乙酸2ml；ddH2O118 ml。包被液（5%脱脂奶粉，现配）：脱脂奶粉1.0g 溶于20ml的0.01M PBS中。
琼脂糖核酸电泳
2009-6-16 12:03:18 阅读158 评论0 162009/06 June16
1.用蒸馏水将制胶模具和梳子冲洗干净，放在制胶平板上，封闭模具边缘，架好梳子；
2.根据欲分离DNA片段大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖凝胶：准确称量琼脂糖干粉，加入到配胶用的三角烧瓶内，定量加入电泳缓冲液（一般20~30 ml）；
3.放入到微波炉内加热熔化。冷却片刻，加入一滴荧光染料，轻轻旋转以充分混匀凝胶溶液，倒入电泳槽中，待其凝固；
4.室温下30~45分钟后凝胶完全凝结，小心拔出梳子，将凝胶安放在电泳槽内；
5.向电泳槽中倒入电泳缓冲液，其量以没过胶面1mm为宜，如样品孔内有气泡，应设法除去；
6.在DNA样品中加入10×体积的载样缓冲液（loading buffer），混匀后，用枪将样品混合液缓慢加入被浸没的凝胶加样孔内；
7.接通电源，红色为正极，黑色为负极，切记DNA样品由负极往正极泳动 (靠近加样孔的一端为负)。一般60～100V电压，电泳20～40min即可；
8. 根据指示剂泳动的位置，判断是否终止电泳；
9.电泳完毕，关上电源，在凝胶成像仪上观察电泳带及其位置，并与核酸分子量标准Marker比较被扩增产物的大小。
琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围
琼脂糖凝胶浓度
线形DNA的最佳分辨范围（bp）
0.5%
1,000～30,000
0.7%
800～12,000
1.0%
500～10,000
2.根据欲分离DNA片段大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖凝胶：准确称量琼脂糖干粉，加入到配胶用的三角烧瓶内，定量加入电泳缓冲液（一般20~30 ml）；
3.放入到微波炉内加热熔化。冷却片刻，加入一滴荧光染料，轻轻旋转以充分混匀凝胶溶液，倒入电泳槽中，待其凝固；
4.室温下30~45分钟后凝胶完全凝结，小心拔出梳子，将凝胶安放在电泳槽内；
5.向电泳槽中倒入电泳缓冲液，其量以没过胶面1mm为宜，如样品孔内有气泡，应设法除去；
6.在DNA样品中加入10×体积的载样缓冲液（loading buffer），混匀后，用枪将样品混合液缓慢加入被浸没的凝胶加样孔内；
7.接通电源，红色为正极，黑色为负极，切记DNA样品由负极往正极泳动 (靠近加样孔的一端为负)。一般60～100V电压，电泳20～40min即可；
8. 根据指示剂泳动的位置，判断是否终止电泳；
9.电泳完毕，关上电源，在凝胶成像仪上观察电泳带及其位置，并与核酸分子量标准Marker比较被扩增产物的大小。
琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围
琼脂糖凝胶浓度
线形DNA的最佳分辨范围（bp）
0.5%
1,000～30,000
0.7%
800～12,000
1.0%
500～10,000
感受态细胞的制备
2009-6-16 12:02:17 阅读643 评论0 162009/06 June16
1.挑取适当菌株的E.coli 单菌落接种于2ml SOB培养液中，37℃摇床过夜。
2.取0.5-1ml过夜培养的菌液转种到50ml SOB中，18℃剧烈震荡，直到A600达到0.6。
3.将培养物转移到50ml离心管中，4℃ 4,000rpm/min离心10min。同时在冰浴上配置TB溶液。
4.弃上清，将离心管倒置于滤纸上，使培养液被吸干。
5.取1ml刚配的TB溶液打散菌体沉淀，再加入15ml TB（1/3体积的起始培养液），冰浴10-15min，4℃ 4,000rpm/min离心10min。
6.弃上清，沉淀重悬于4ml TB（1/12.5体积的起始培养液），冰浴10min。
7.加入280μl DMSO，缓缓滴入并轻轻摇晃，使其充分混合均匀，冰浴10min。
8.将菌液分装于EP管中，-80℃或液氮冻存。
9. 取两管感受态细胞分别加入1μl无菌ddH2O（阴性对照）和1μl纯质粒（阳性对照）进行转化（见后），以检测感受态的质量。阴性对照平板上应该无菌落生长，阳性对照平板上菌落数目的多少显示感受态效率的高低。
SOB的配制：
蛋白胨 20g
酵母提取物 5g
NaCl 0.58g
2.取0.5-1ml过夜培养的菌液转种到50ml SOB中，18℃剧烈震荡，直到A600达到0.6。
3.将培养物转移到50ml离心管中，4℃ 4,000rpm/min离心10min。同时在冰浴上配置TB溶液。
4.弃上清，将离心管倒置于滤纸上，使培养液被吸干。
5.取1ml刚配的TB溶液打散菌体沉淀，再加入15ml TB（1/3体积的起始培养液），冰浴10-15min，4℃ 4,000rpm/min离心10min。
6.弃上清，沉淀重悬于4ml TB（1/12.5体积的起始培养液），冰浴10min。
7.加入280μl DMSO，缓缓滴入并轻轻摇晃，使其充分混合均匀，冰浴10min。
8.将菌液分装于EP管中，-80℃或液氮冻存。
9. 取两管感受态细胞分别加入1μl无菌ddH2O（阴性对照）和1μl纯质粒（阳性对照）进行转化（见后），以检测感受态的质量。阴性对照平板上应该无菌落生长，阳性对照平板上菌落数目的多少显示感受态效率的高低。
SOB的配制：
蛋白胨 20g
酵母提取物 5g
NaCl 0.58g
影响质粒载体稳定性的主要因素
2009-6-16 11:50:02 阅读278 评论0 162009/06 June16
影响质粒载体稳定性的主要因素有：
①宿主细胞代谢负荷增加 质粒载体可使宿主细胞的代谢负荷加重，有的能延长其世代时间15％左右。质粒载体的大小同宿主细胞生长延缓的程度呈正相关，这可能是由于质粒载体相对分子质量大，则对宿主细胞DNA复制的负荷更大的缘故。同样，宿主细胞如维持质粒载体中外源基因的表达活性，势必在DNA转录和蛋白质翻译上承受更多的额外负担。
②细胞中所含质粒载体的拷贝数 细胞中所含质粒载体的拷贝数各不相同，也是影响质粒丢失的一个因素。拷贝数差别不大时，质粒载体相对地稳定；拷贝数相差悬殊，则很容易造成一些细胞丢失质粒，并逐渐发展为优势群体。
③宿主细胞DNA重组系统的作用 质粒载体之间发生重组会形成二聚体、三聚体，甚至四聚体等所谓的质粒寡聚体(plasmid oligomer)，其稳定性比单体差。此外，质粒载体中外源DNA片段的大小同质粒寡聚化的程度也密切相关。
①宿主细胞代谢负荷增加 质粒载体可使宿主细胞的代谢负荷加重，有的能延长其世代时间15％左右。质粒载体的大小同宿主细胞生长延缓的程度呈正相关，这可能是由于质粒载体相对分子质量大，则对宿主细胞DNA复制的负荷更大的缘故。同样，宿主细胞如维持质粒载体中外源基因的表达活性，势必在DNA转录和蛋白质翻译上承受更多的额外负担。
②细胞中所含质粒载体的拷贝数 细胞中所含质粒载体的拷贝数各不相同，也是影响质粒丢失的一个因素。拷贝数差别不大时，质粒载体相对地稳定；拷贝数相差悬殊，则很容易造成一些细胞丢失质粒，并逐渐发展为优势群体。
③宿主细胞DNA重组系统的作用 质粒载体之间发生重组会形成二聚体、三聚体，甚至四聚体等所谓的质粒寡聚体(plasmid oligomer)，其稳定性比单体差。此外，质粒载体中外源DNA片段的大小同质粒寡聚化的程度也密切相关。
快速质粒鉴定方法
2009-6-12 16:43:54 阅读217 评论0 122009/06 June12
1.用1.5ml离心管收集一定量(1ml,留0.2ml)含有重组质粒的菌液，10000rpm, 30sec,弃上 清，留管底沉淀（应留有一定量(0.2)的菌液放于4度中，以备摇菌）
2.加入30－50ul TE ,重悬菌液，混合均匀
3.加入25ul 酚:氯仿:异戊醇（25:24:1),混合均匀
4.加入5ul 上样缓冲液（6X or10X),混合均匀,12000rpm, 10min,
取蓝色上清液（约20－30ul)直接进行电泳，结果会显示条带
a:最上边，几万bp的条带是基因组DNA
b:其次，下边是你所要的重组质粒，约几千bp
c:再下边可能会出现RNA的三条带，总共就这几条带
通过经验，来判断一下看看哪个应该是连上了，哪个没连上，最后把连上的那个挑出来，然后用放在 4度中的对应的那个菌，摇菌，第二天再提质粒
就可以了。简单，方便，省时，省钱....
2.加入30－50ul TE ,重悬菌液，混合均匀
3.加入25ul 酚:氯仿:异戊醇（25:24:1),混合均匀
4.加入5ul 上样缓冲液（6X or10X),混合均匀,12000rpm, 10min,
取蓝色上清液（约20－30ul)直接进行电泳，结果会显示条带
a:最上边，几万bp的条带是基因组DNA
b:其次，下边是你所要的重组质粒，约几千bp
c:再下边可能会出现RNA的三条带，总共就这几条带
通过经验，来判断一下看看哪个应该是连上了，哪个没连上，最后把连上的那个挑出来，然后用放在 4度中的对应的那个菌，摇菌，第二天再提质粒
就可以了。简单，方便，省时，省钱....